<br><font size=2 face="sans-serif">Hi all,</font>
<br>
<br><font size=2 face="sans-serif">I am running sedimentation velocity
experiments on an IgG that is ~201kDa in size.</font>
<br>
<br><font size=2 face="sans-serif">Previous analysis was performed in triplicate
in 15 mM histidine pH 5.2 and using Sedfit the MWs were calculated to be
~183kDa. Much lower than expected. The thought was that possibly solution
non-ideology was in play and that if the samples were in 1X PBS the MW
calculations would improve. Frictional coefficients were ~1.54 and were
floated in Sedfit.</font>
<br>
<br><font size=2 face="sans-serif">This week I have performed the experiment
again in triplicate in 1X PBS and I get the same values for the MW ~183
kDa. Playing around with the data, I found that if I set the f/f0 to ~1.63
or so and do not float it, my MW values come up to a more expected result
of around ~200 kDa.</font>
<br>
<br><font size=2 face="sans-serif">Is it good practice to NOT float the
f/f0 and set the value? Would there be good scientific rational for that?
I was taught that the f/f0 should always be floated.</font>
<br>
<br><font size=2 face="sans-serif">Best regards,<br>
Leslie<br>
</font>
<table>
<tr>
<td colspan=4 bgcolor=white>
<hr noshade>
<tr>
<td bgcolor=white><font size=1 face="Arial"><b>Leslie T Alessandri</b><br>
Scientist<br>
Process Sciences, Protein Analytics</font>
<td bgcolor=white valign=top><a href=http://www.abbott.com/><font size=1 color=blue face="Arial"><u>Abbott
Bioresearch Center</u></font></a><font size=1 face="Arial"><br>
100 Research Drive<br>
Worcester, MA 01605</font>
<td bgcolor=white valign=top><font size=1 face="Arial">Office 508-688-3478<br>
FAX 508-793-4885</font><font size=1 color=blue face="Arial"><u><br>
</u></font><a href=mailto:leslie.alessandri@abbott.com><font size=1 color=blue face="Arial"><u>leslie.alessandri@abbott.com</u></font></a>
<td bgcolor=white valign=top><font size=1 face="Arial"><br>
</font><img src=cid:_1_07FF566007FF5260004DD0B8852577E0>
<tr>
<td colspan=4>
<hr noshade>
<div align=center>
<br><font size=3 face="Times New Roman"><b> </b></font></div>
<tr>
<td colspan=4><font size=1 color=#808080 face="Arial">This communication
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<br>
<br><font size=3 face="Times New Roman"> </font>